Coronavirus NL63 گونه ای از خانواده Coronaviridae است

Coronavirus NL63 گونه ای از خانواده Coronaviridae است. این ویروس ها با یک لایه دو فسفولیپید احاطه شده اند ، که حاوی حس مثبت تک رشته ای است (1). این خانواده شامل دو زیر خانواده ، Coronavirinae و Torovirinae است. زیرمجموعه‌ی Coronavirinae به چهار زیر گروه از جمله ویروس آلفا ، بتا ، گاما و دلتا کرونا تقسیم می شود که در اصل بر اساس تقسیم فیلوژنتیک (2) است. اندازه ژنوم تقریباً 33 - 26 KB است که از بین ژنوم های ویروس RNA بزرگتر است و در دو انتهای 5 و 3 دارای کلاه و پلی آدنین است. در ساختار ژنومی ، دو سوم ژنوم 5 'حاوی ORF1a و ORF1b است در حالی که در منطقه 3' ، چهار پروتئین ساختاری بنام سنبله (S) ، پاکت (E) ، غشای (M) و نوکلئوکپسید (N) یافت می شود. . ژن هموگلوتینین استراز (HE) یکی از مشخصه های گروه دوم کروناویروس است که در ویروس HCoV-NL63 وجود ندارد (4).

کورون ویروس ها در سراسر جهان توزیع شده و یکی از شایع ترین علل عفونت دستگاه تنفسی فوقانی (URTI) در بزرگسالان است (5). این ویروس ها می توانند انسان و انواع حیوانات خانگی را آلوده کرده و باعث بیماری هایی مانند عفونت تنفسی ، گاستروانتریت ، بیماری های قلبی عروقی و بیماری های عصبی شوند. تاکنون شش انسداد ویروس انسانی از جمله OC43 ، 229E ، NL63 ، HKU-1 ، SARS و MERS شناسایی شده اند که از این میان SARS و MERS بالاترین میزان مرگ و میر و OC43 ، 229E ، NL63 و HKU-1 تلفات کمتری دارند ( 6-8). اعتقاد بر این است که این ویروس ها دارای مخازن جانوری بوده و از جنون وحشی هستند. مهمترین مخازن شتر درامدراری ، گاو و خفاش ها هستند. در حال حاضر ، مخزن ویروس HKU-1 ناشناخته استویروس HCoV-NL63 از گروه α coronavirus برای اولین بار در سال 2004 در کودک مبتلا به برونشیولیت در هلند شناسایی شد (12). در چین ویروس HCoV-NL63 اصلی ترین پاتوژن تنفسی در نوزادان و افراد مسن است. عفونتهای تنفسی تحتانی 30٪ از کل عفونتهای تنفسی را شامل می شود و می تواند باعث بروز بیماریهای شدید تنفسی در نوزادان ، کودکان خردسال ، سالمندان و افراد دارای سیستم ایمنی کمبود سیستم ایمنی شود (13 ، 14). برخی از این ویروس ها ، مانند SARS ، می توانند باعث عفونت های کشنده شوند. بنابراین ، تشخیص به موقع می تواند از انتقال به سایر کودکان سرکوب شده در سیستم ایمنی جلوگیری کند (15). مطالعات اپیدمیولوژیک نشان داده است که عفونتهای تنفسی ویروسی ، مانند آنفلوانزا و عفونتهای پاراآنفلوآنزا در کودکان ، در اواخر پاییز یا زمستان به اوج خود می رسند و کودکانی که دارای علائمی مشابه عفونت آنفولانزا هستند. این علائم بیشتر شبیه به بیماری های ناشی از کورو ویروس ها ، به ویژه HCoV-NL63 است. عفونت با این ویروس علائمی مشابه عفونت آنفولانزا ایجاد می کند ، که مانع از درمان مناسب کودکان می شود. این باعث می شود کودکانی که از ذات الریه و تنفس رنج می برند در بخش مراقبت های ویژه بستری شوند یا حتی منجر به مرگ شوند (16 ، 17). بنابراین ، این مطالعه فراوانی عفونت کوراو ویروس NL63 را در کودکان خردسال کمتر از 5 سال تعیین کرد.

 2. اهداف

عفونت کورون ویروس علائم خاصی ندارد و ممکن است با سایر عفونت های ویروسی اشتباه گرفته شود. عدم موفقیت در درمان مناسب و به موقع می تواند صدمات جبران ناپذیری به کودکان وارد کند. این مطالعه با هدف تعیین فراوانی عفونت کروناویروس NL63 در کودکان زیر 5 سال مبتلا به عفونت تنفسی فوقانی و ارتباط آن با تظاهرات بالینی و میزان پراکندگی در گروه های سنی و جنسی مختلف انجام شد.

 3. روشها

3.1 بیماران

در یک مطالعه مقطعی ، 138 کودک زیر 5 سال مبتلا به عفونتهای حاد تنفسی بستری شده در بخش مراقبت های ویژه کودکان و نوزادان (PNICU) بیمارستان افضلی پور ، استان کرمان را برای 11 ماه از اکتبر 2018 تا دسامبر 2019 ثبت نام کردیم. نمونه سواب دهان و حلق در لوله های حاوی کشتار عادی استریل جمع آوری شد. کودکان بستری شده فقط به عفونت تنفسی مبتلا بودند و هیچ بیماری نقص ایمنی ، نارسایی قلبی و بیماری خونی نداشتند.

3.2 تأیید اخلاق و رضایت از مشارکت

این مطالعه (شماره: 96000908) توسط کمیته اخلاق دانشگاه علوم پزشکی کرمان تصویب شد. کد تصویب اخلاقی IR.KMU.REC.1397.134 است. کلیه والدین طبق دستورالعمل های بین المللی رضایت آگاهانه کتبی ارائه داده اند.

3.3 استخراج RNA ویروسی

نمونه های حلق و بینی و بینی با استفاده از سواب Dacron در رسانه ویروس حمل و نقل (VTM) حاوی DMEM و داروهای ضد باکتریایی (پنی سیلین و استرپتومایسین) جمع آوری شد. RNA ویروسی از یک حجم 100 میکرولیتر از نمونه ها با روش بارش (RIBO-prep، ILS) استخراج شد. به طور خلاصه ، نمونه به یک لوله حاوی 300 میکرولیتر بافر لیز و 400 میکرولیتر از بافر رسوب ، مخلوط شده ، به مدت 10 دقیقه در دمای اتاق انکوبه شد و به مدت 13 دقیقه در 13000 دور در دقیقه سانتریفیوژ شد. سپس ، آن را یک بار با 500 میکرولیتر از بافر شستشو W3 و یک بار با 200 میکرولیتر 70٪ (ولت / ولت) اتانول (بافر شستشو W4) شسته و سپس به مدت 10 دقیقه در 60 درجه سانتیگراد خشک کرد. سپس در 50 میکرولیتر از آب فاقد RNase به حالت تعلیق درآمده و در دمای 20 درجه سانتیگراد ذخیره شد.

3.4 NL63 Real-Time PCR

کورو ویروس انسانی (HCoV-NL63) کیت RT-PCR در زمان واقعی برای تشخیص تاج ویروس انسانی NL63 استفاده شد (Biosb ، Shanghai ZJ Bio-Tech Co.، Ltd.، China). کورو ویروس انسانی (HCoV-NL63) کیت RT-PCR در زمان واقعی حاوی یک سیستم آماده استفاده خاص برای تشخیص ویروس HCoV-NL63 با واکنش زنجیره ای پلیمراز رونویسی معکوس (RT-PCR) در زمان واقعی PCR سیستم. یک کنترل مثبت خارجی (107 copies 1 / کپی در میلی لیتر) برای تعیین بار ویروسی استفاده شد. برنامه PCR شامل یک مرحله دناتوراسیون اولیه در 95 درجه سانتیگراد به مدت 10 دقیقه و به دنبال آن 40 چرخه تقویت در 95 درجه سانتیگراد به مدت 15 ثانیه و 60 درجه سانتیگراد به مدت یک دقیقه بود.

3.5. تحلیل آماری

تجزیه و تحلیل آماری با استفاده از IBM SPSS آمار 21.0 (IBM ، Armonk ، NY) انجام شد. متغیرهای کیفی خاص با استفاده از آزمون کای دو مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت ، در حالی که متغیرهای کمی و عددی با استفاده از آزمونهای t مستقل مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. اختلاف در مقادیر P کمتر از 05/0 در نظر گرفته شد.

 4. نتایج

از 138 نمونه ، 77 مورد (8/55٪) از مردان و 61 نفر (2/44٪) از زنان بودند. میانگین سنی زنان و مردان به ترتیب 63/4 ± 6/6 33 6/33 سال و 63/3 ± 65/22 22 بود. جوانترین شرکت کننده یک نوزاد سه ماهه بود که دارای عفونت تنفسی بود (جدول 1). از 138 بیمار مبتلا به عفونت تنفسی فوقانی ، 33 نفر (9/23٪) از نظر کرونավիր ویروس NL63 مثبت بودند ، از این تعداد 21 نفر (6/63٪) از مردان و 12 نفر (36.4٪) از زنان ، با نسبت مرد به زن 1.75 بودند. جوانترین شرکت کننده آلوده یک نوزاد چهار ماهه بود و پیرترین سن آن 72 ماه بود. نقش آنتی بادی های مادری در جلوگیری از عفونت هنوز مشخص نشده است.